The mini-Tn7 vectors are universally applicable in gram-negative bacteria and thereby facilitate the manipulation of many organisms for which few genetic systems are available. These vectors, when provided with only the Tn7 site-specific transposition machinery, insert site and orientation specifically in the bacterial chromosome at an attTn7 site downstream of the essential glmS gene. A few bacteria, including Burkholderia spp., contain multiple glmS genes and therefore several attTn7 sites. Here we provide a protocol for application of the mini-Tn7 system in B. mallei as an example of bacteria with multiple glmS sites. The procedure involves, first, cloning of the genes of interest into an appropriate mini-Tn7 vector; second, co-transfer of the recombinant mini-Tn7 vector and a helper plasmid encoding the Tn7 site-specific transposition pathway into B. mallei by conjugation, followed by selection of insertion-containing strains; and last, PCR verification of mini-Tn7 insertions. B. mallei possesses two glmS genes on chromosome 1 and Tn7 transposes to both sites, although transposition to attTn7-1 associated with glmS1 occurs in more than 90% of the clones examined. Transposition is efficient and the whole procedure from start to verification of insertion events can be done in less than 5 d. This first chromosome integration system in B. mallei provides an important contribution to the genetic tools emerging for Burkholderia spp. Vectors are available for gene complementation and expression, and gene fusion analyses.
中文翻译：
在具有多个glmS连锁attTn7位点的细菌中进行mini-Tn7插入：例如Burkholderia mallei ATCC 23344。
mini-Tn7载体普遍适用于革兰氏阴性细菌，因此有助于操纵许多遗传系统不多的生物。这些载体仅提供Tn7位点特异的转座机制时，会在细菌染色体中在必需glmS基因下游的attTn7位点上特异性插入位点和方向。一些细菌，包括伯克霍尔德氏菌（Burkholderia spp。），包含多个glmS基因，因此包含多个atTTn7位点。在这里，我们提供了将mini-Tn7系统应用在马来酸双孢菌中的协议，作为具有多个glmS位点的细菌的示例。该程序首先涉及将目的基因克隆到适当的mini-Tn7载体中；第二，通过缀合，将重组mini-Tn7载体和编码Tn7位点特异性转座途径的辅助质粒共转移至马氏芽孢杆菌中，然后选择含插入菌株；最后是mini-Tn7插入片段的PCR验证。尽管在超过90％的克隆中都发生了与glmS1相关的attTn7-1的转座，但B. Mallei在1号染色体上拥有两个glmS基因，Tn7易位到两个位点。换位是有效的，并且从开始到插入事件验证的整个过程都可以在5天内完成。B. Mallei中的第一个染色体整合系统为Burkholderia spp出现的遗传工具提供了重要贡献。载体可用于基因互补和表达以及基因融合分析。然后选择含有插入物的菌株；最后是mini-Tn7插入片段的PCR验证。尽管在超过90％的克隆中都发生了与glmS1相关的attTn7-1的转座，但B. Mallei在1号染色体上拥有两个glmS基因，Tn7易位到两个位点。换位是有效的，并且从开始到插入事件验证的整个过程都可以在5天内完成。B. Mallei中的第一个染色体整合系统为Burkholderia spp出现的遗传工具提供了重要的贡献。载体可用于基因互补和表达以及基因融合分析。然后选择含有插入物的菌株；最后是mini-Tn7插入片段的PCR验证。B. Mallei在1号染色体上拥有两个glmS基因，Tn7转座到两个位点，尽管90％以上的克隆发生与glmS1相关的attTn7-1的转座。换位是有效的，并且从开始到插入事件验证的整个过程都可以在5天内完成。B. Mallei中的第一个染色体整合系统为Burkholderia spp出现的遗传工具提供了重要的贡献。载体可用于基因互补和表达以及基因融合分析。尽管转座到与glmS1相关的attTn7-1的转座发生在90％以上的克隆中。换位是有效的，并且从开始到插入事件验证的整个过程都可以在5天内完成。B. Mallei中的第一个染色体整合系统为Burkholderia spp出现的遗传工具提供了重要的贡献。载体可用于基因互补和表达以及基因融合分析。尽管转座到与glmS1相关的attTn7-1的转座发生在90％以上的克隆中。换位是有效的，并且从开始到插入事件验证的整个过程都可以在5天内完成。B. Mallei中的第一个染色体整合系统为Burkholderia spp出现的遗传工具提供了重要的贡献。载体可用于基因互补和表达以及基因融合分析。